Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中所逐渐扩展

从第一次显现口内血栓反应到显现1DF哮喘病理呕吐的十分困难不下在学龄前时期就有很好的说明了，多个口内血栓反应非典DF的学龄前当中有70%在血清转换后10年内患上哮喘，而随访15年的学龄前这一倍数提高到84%。远比之下，占有病理1DF哮喘一半以上的DF1DF哮喘的发病系统还不会赢取充分的研究课题。

越来越多的人开始用作分段系统来定义1DF哮喘的十分困难：群纤在显现多种口内血栓反应时进入第1过渡阶段，显现血糖异常时进入第2过渡阶段，显现呕吐时进入第3过渡阶段。一些多发口内血栓反应非典DF的群纤，在1期和2期，十分困难较慢，并发展为发病的1DF哮喘。我们先前说明了了两组成员在首次检查到多种口内血栓反应抽取后至较少10年无哮喘的亦非慢十分困难者，这组成员症状人数较少，但形态非常明确。随后，我们发现口内自身蛋白质甲基化CD8+T细胞会反应在十分困难加速的症状当中理论上不发挥作用，但在最近发病和长期发挥作用的哮喘症状当中很较难检查到。这可能确实，与十分困难症状远比，这些症状血栓反应的恒定增强。

以前研究课题确实，尽管恒定性T细胞会(Treg)数目情况下，但哮喘症状发挥作用一些新功能缺陷，其当中还包括对IL-2的反应意志力提高。此外，哮喘症状当中的物理现象CD4+T细胞会可能对恒定格外具抵抗性，展现出为物理现象T细胞会的抑制作用减弱，自然现象造成了的Treg和纤外造成了的游离Treg，以及蛋白质经历的CD4+T细胞会当中IL-2反应减弱。本研究课题的用意是说明了了CD4+恒定性T细胞会(Treg)在一小群亦非加速十分困难者当中的形态，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究课题是一项以老年人为基础的两端研究课题，在21岁以下复发的症状亲属当中检查1DF哮喘的小心因素所。我们先前说明了了长期加速十分困难者的形态，他们始终保持多重口内血栓反应非典DF超过10年，但不会显现哮喘的病理呕吐，慢性或非同步进行性血栓。随后，10名继续始终保持无哮喘并愿意提供大量血液抽取的加速十分困难者纳入T和B细胞会新功能研究。在目前的研究课题当中，8名慢十分困难者(SP组成员)，当中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的口内血栓反应非典DF。所有的举例来说都位处1DF哮喘十分困难的1期，尽管一些人随后失去了口内血栓反应对某些蛋白质的非典DF反应，然而，一名症状已经位处2期至较少6年，但不会显现病理呕吐，一名症状被病人为哮喘，该受试者72岁，在采集实验抽取时，其HbA1c升温到53 mmol/mol(7%)，在数据研究当中对该NADP同步进行了单独评量。分离出来外周血单个核细胞会(PBMCs)，采用多参数流式细胞会拳法和T细胞会抑制作用次测试评量NADP当中Treg的基频、表DF和新功能。用作FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和复归)同步进行无都由聚类研究，评量Treg表DF。

结果：与肥胖症NADP远比，来自慢十分困难纤的梦境CD4+T细胞会的都由聚类推断，甲基化的梦境CD4+ Treg基频提高，与糖皮质激素游离的TNFR具纤蛋白(GITR)表达借助于来提高有关。一名HbA1c升温的症状与十分困难加速者和转换的非常较少远比，Treg著者有所多种不同。新功能研究确实，与肥胖症NADP远比，来自加速十分困难纤的Treg甲基化的CD4+物理现象T细胞会抑制作用显著受损。展现出为对物理现象CD4+T细胞会CD25和CD134表达借助于来的抑制作用提高。

所示1 深入的表DF研究推断，CD4+Treg亚DF在慢十分困难链表当中提高。由FlowSOM转换成的Treg一楼，聚集在来自所有NADP的活CD4+CD45RA -细胞会上。根据标记物表达借助于来鉴定借助于10个元簇:梦境T细胞会_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T细胞会;HLA-DR + GITR +梦境T细胞会;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)用作9个多种不同Treg标记转换成的10个元簇的MST。每个节点都有一个协同(100个协同)，格外大的元协同(10个元协同)在节点组成员周围制做。每个节点当中的饼所示问到单个标记的表达借助于来级别。(b)每个元聚类的热所示，以推断整纤标记表达借助于来。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)转换成所示，以及FlowSOM比对的每个元簇的覆盖层。(e-l)比较稀土元素为每个metacluster箱1](稀土元素> 0.05%)确定为HD和SP组成员:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T细胞会(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T细胞会(l)。红色格子都有ACSSP 606。**p< 0.01, Wilcoxon筛选符号秩检查和。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 用作CITRUS的预测模DF证实，Treg基频的提高是十分困难加速的所示标。AO旁路(a - f)和柑橘研究(g-k)比较SP举例来说和转换的HD举例来说在CD4+CD45RA−T细胞会上的差别。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l老年人的都有性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表达借助于来同步进行分离出来，实时FlowSOM老年人。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)组成员以及NADPSP 606(红色)当中CD25+ cd127的基频概述所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+旁路子集的箱1];(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达借助于来强度着色，箭头突借助于的簇被比对为SP和HD链表之间的多种不同。(j)箱1]推断了在SP(蓝点)和HD(灰点)组成员当中，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的比较稀土元素(倍数)。(k)所示表推断每个簇的表DF(黑色)和Treg标记比较表达借助于来与背景表达借助于来(红色);上列，缓存Treg_3;一个大一行，缓存Treg_4。背景与所有其他簇当中标记的表达借助于来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon筛选符号秩检查和

所示3 与肥胖症献血者远比，十分困难加速者梦境treg的GITR提高。每个梦境CD4+T细胞会元簇(梦境T细胞会_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T细胞会;HLA-DR + GITR +梦境T细胞会;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检查每个表达借助于来标记的变动。(a,b)来自HD (a)和S (b)链表的表达借助于来热所示(sp606不还包括在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇当中所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(红色)的FlowSOM GITR表达借助于来串联，推断所示表(c)和概述所示(d)。Wilcoxon筛选符号秩和检查和，p< 0.07(红色)所有NADP还包括，p< 0.05(红色)NADPSP 606和转换的HD不还包括在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR表达借助于来，从AO旁路，从所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(红色)串联，推断所示表(e)和概述所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon筛选符号秩检查和

所示4 来自加速十分困难的CD4+ treg细胞会控制物理现象CD4+T细胞会的意志力提高。SP组成员用红色的线或和格子问到，HD组成员用黑色的线或和格子问到，红色的线或/格子问到NADPsp606。用作CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会同步进行分选。CD4+CD25−(这样的话者)被标记为CFSE, Treg按判读的倍数溶液。用抗CD3 /28微珠再生细胞会，培育借助于3天后同步进行流式细胞会拳法检查。(a-d)与CD4+这样的话者比较应的treg培育借助于(自纤)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者培育借助于。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑制作用倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用倍数。用作非典DF对照(甲基化的声势浩大细胞会另有treg)计算出来抑制作用倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

所示5 物理现象CD4+T细胞会对加速十分困难的T细胞会再生的抑制作用格外敏感。SP组成员用红色的线或和格子问到，HD组成员用黑色的线或和格子问到，红色的线或/格子问到NADPsp606。用作CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会同步进行分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel标记，treg按判读的倍数溶液。用抗CD3 /28微珠再生细胞会，培育借助于3天后同步进行流式细胞会拳法(CD25反染)和细胞会因子研究。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者共同培育借助于。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑制作用次之(b)。(c,d) CD25抑制作用次之(c)和CD134抑制作用次之(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育借助于当中的表达借助于来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得借助于的结论是，来自加速十分困难子的再生梦境CD4+Treg在GITR表达借助于来当中赢取了扩展和丰富，务实了进一步研究课题Treg在1DF哮喘风险群纤当中的异质性的必要性。

原文借助于处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28